今天宠物迷的小编给各位宠物饲养爱好者分享分子探针的作用的宠物知识,其中也会对分子探针是什么?(分子探针是什么材料)进行专业的解释,如果能碰巧解决你现在面临的宠物相关问题,别忘了关注本站哦,现在我们开始吧!
以分子杂交为基础的技术均用探针来检测具有互补序列的核酸序列。探针既可以是**的或PCR扩增的DNA分子,也可以是人工合成的寡聚核苷酸或经体外转录的RNA分子。探针必须是纯一的,不含有其他不同的核酸。为了保证通过碱基互补来检测目的基因,探针必须为单链分子。所以双链的DNA探针在应用前必须变为单链,一般采用加热的方法使双链DNA探针变性,原为单链的寡聚核苷酸和RNA探针的RNA分子无需变性处理即可使用。用放射性同位素标记探针,则杂交分子可通过放射自显影技术进行观测。近代,人们发展了非放射性同位素标记系统,常用的探针标记系统是用甾类化合物***配基标记探针。
荧光探针是建立在光谱化学和光学波导与测量技术基础上,选择性的将分析对象的化学信息连续转变为分析仪器易测量的荧光信号的分子测量装置。
荧光探针受到周围环境的影响,使其发生荧光发射发生变化,从而使人们获知周围环境的特征或者环境中存在的某种特定信息
灵敏度高,选择性好,使用方便,成本低,不需预处理,不受外界电磁场影响,远距离发光.
识别基团决定了探针分子的选择性和特异性,报告基团则决定了识别的灵敏度,而连接体部分则可起到分子识别枢纽的作用。
能,DNA探针利用的是碱基互补配对的原理,可以检测出DNA的序列,当然也就能检测常见的遗传病,但并不能检测所有的遗传病(例如染色体引起的疾病)。
碱基互补配对原理:
DNA含4种碱基:A(腺嘌呤)、T(胸腺嘧啶)、C(胞嘧啶)、G(鸟嘌呤),碱基互补配原则,A只能和T配对,C只能和G配对。
我给你做个比喻,希望对你理解有帮助。将宿主DNA(一般做**是有很多宿主DNA)比喻成很多还没装锁的“门”,而你希望插入宿主DNA上(或替换掉一段序列)的目的基因比做是一把特定的“锁”,而这个基因探针就是能开那把锁唯一的“钥匙”。如果你能用“钥匙”打开某个“门”,说明“锁”已经装上了。也就是说如果能检测到杂交信号,说明目的基因已经接到宿主DNA上了。
杂交的原理其实就是碱基互补配对。
至于怎么看出来是否杂交上,这个是要在探针上做标记(标记可以有很多种,生物的、荧光的、放射性的等等),杂交后是要洗脱的,只有这种特异性的杂交才被保留下来,再通过检测探针上的标记来看出是否杂交上。比如上面的“钥匙”,就像你用一串的“钥匙”去试,但你可以先在要的那个“钥匙”上做个标记,你不要认识“钥匙”的齿(这里的齿你可以想像成探针的序列),只要认识“钥匙”上的标记就行。
(这个比喻有点漏洞,就是原始的那些“门”不管用不用钥匙都不能打开,但我暂时没想到其它比方)
此题的考点在,DNA分子探针的作用。
DNA分子探针用于检测DNA序列,即基因上的问题。那么我们要选择的就是由基因决定的病。
地方性甲仲,是缺碘导致,即基因没有问题,只要补碘就可治疗。骨质软化是缺钙和少量微量元素,即基因也没有问题。缺铁贫血病是缺铁,只要补铁就行,基因也无问题。
只有乙肝,乙肝是由**入侵宿主,引起的**基因复制,人体内细胞中有不属于自己的**基因,即乙肝**特有的DNA,此时用DNA分子探针,进行DNA分子杂交,即可检测出来。
希望有用
PS所属,必为精品
基因探针(probe)又称“寡核苷酸探针”,简称“探针”,就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列,它可以包括整个基因,也可以仅仅是/基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。
1.探针的来源 DNA探针根据其来源有3种:一种来自基因组中有关的基因本身,称为基因组探针(genomic probe);另一种是从相应的基因转录获得了mRNA,再通过逆转录得到的探针,称为cDNa 探针(cDNa probe)。与基因组探针不同的是,cDNA探针不含有内含子序列。此外,还可在体外人工合成碱基数不多的与基因序列互补的DN**段,称为寡核苷酸探针。
2.探针的制备 进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子**(molecular cloning)获得的。**是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DN**段的**噬菌斑,通过原位杂交,从中可筛出含有目的基因片段的**,然后通过细胞扩增,制备出大量的探针。
为了制备cDNA 探针,首先需分离纯化相应mRNA,这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到,如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。
寡核苷酸探针是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量,也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。
3.探针的标记 为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交,有必要对探针加以标记,以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性同位素32P标记探针的某种核苷酸α磷酸基。但近年来已发展了一些用非同位素如生物素、***配体等作为标记物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。最常用的探针标记法是缺口平移法(nick translation)。首先用适当浓度的DNA酶Ⅰ(DNAseⅠ)在探针DNA双链上造成缺口,然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ(DNa poly merasⅠ)的5’→3’的外切酶活性,切去带有5’磷酸的核苷酸;同时又利用该酶的5’→3’聚酶活性,使32P标记的互补核苷酸补入缺口,DNA聚合酶Ⅰ的这两种活性的交替作用,使缺口不断向3’的方向移动,同时DNA链上的核苷酸不断为32P标记的核苷酸所取代。
探针的标记也可以采用随机引物法,即向变性的探针溶液加入6个核苷酸的随机DNA小片段,作为引物,当后者与单链DNA互补结合后,按碱基互补原则不断在其3’OH端添加同位素标记的单核苷酸,这样也可以获得比放射性很高的DNA探针。
荧光探针是建立在光谱化学和光学波导与测量技术基础上,选择性的将分析对象的化学信息连续转变为分析仪器易测量的荧光信号的分子测量装置。 荧光探针受到周围环境的影响,使其发生荧光发射发生变化,从而使人们获知周围环境的特征或者环境中存在什么是小分子荧光探针
探针 利用杂交技术检测特异核酸序列必须使用探针。一个探针可以是能检测互补核酸序列的简单的DNA或RNA分子。探针必须是纯净的,而且不受其他不同序列核酸的影响。典型的探针是**的DNA序列或通过PCR扩增获得的DNA。人工合成的寡核苷酸或从体外转录**的DNA序列后获得的RNA,也常作为探针。允许使用互补的配对碱基对靶核酸检测,但所用探针必须是单链。寡核苷酸和RNA探针是自然的单链分子,然而,DNA分子正常情况下是双链,在对靶序列杂交前,DNA分子必须变为单链,这一般是通过加热使其变性而达到解链目的。解链DNA分子被迅速**到只能缓慢复性的温度以下,可使探针保持单链状态。靶DNA分子的检测要求用药物标记,以便观察杂交结果。探针一般用放射性同位素标记,如P32、S35、C14或H3。杂交体发出的射线,能使X光片感光而被观察到,这称为放射自显影。由于放射性物质的使用,对人体有风险,使得非放射性探针有了进一步的发展。常用***(DIG)标记探针,它可被用染料标记或结合有能催化底物并形成有色产物的酶的特异性抗体检测到。
DNA探针技术,又称核酸杂交技术,其特异性强,敏感性高,是具有潜力的诊断技术之一。在寄生虫病的诊断、现场调查及虫种鉴定等方面均已使用了DNA探针技术.
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